第二十四章 终结（2 / 2）

3D：在SLC25A39-KO细胞中过表达SLC25A40cDNA可以恢复线粒体GSH的水平（图3d），这表明在GSH进入线粒体的功能上SLC25A39/40具有冗余。

3E：作者首先需要在SLC25A39/40-KO后，恢复了线粒体GSH水平，这存在一定的挑战。因为在哺乳动物细胞中的GSH合成需要三个基因（GCLC、GCLM和GSS），它们编码GCL全酶和GSH合成酶。其次，GSH是GCL的非变构反馈抑制剂，会阻碍GSH的高效生产。为此，他们在嗜热链球菌在内的几种细菌中找到了一种双功能酶GshF，它同时具有GCL全酶和GSH合成酶活性

3f:与真核GCL不同，GshF不显示反馈抑制，从而允许有效的GSH积累。由于线粒体本身存在GSH合成前体，作者接下来生成了线粒体靶向GshF(mito-GshF)，它可以有效定位于线粒体

3g:发现mito-GshF的表达完全弥补了SLC25A39敲除细胞中线粒体GSH水平的降低

3h:挽救了SLC25A39/40双敲除细胞中线粒体GSH合成被抑制时的抗增殖作用

作者接下来想要探究小鼠线粒体GSH合成被抑制后的生理后果。作者使用CRISPR-Cas9生成了全身SLC25A39-KO小鼠，发现胚胎在第13.5天致死，胚胎显得苍白，呈现严重贫血表型。为了更准确地检查线粒体GSH消耗对红细胞生成的影响程度，作者制备在红细胞谱系中SLC25A39-KO小鼠，发现与前面全身SLC25A39-KO小鼠的观察结果相一致，这些小鼠也表现出严重的贫血，完全缺乏Ter119+细胞、铁过载和胎儿肝细胞凋亡增加（图4a，b）。

尽管SLC25A39/40在细胞增殖和红细胞发育中发挥重要作用，但机制不明。因此，接下来作者就对SLC25A39/40双敲除的Jurkat细胞进行了无偏见的蛋白质组学分析（图4c）。

GO分析揭示了线粒体翻译和含铁硫簇蛋白的显着下调（图4d）

并通过在SLC25A39/40双敲除细胞中发现的乌头酸酶活性降低（图4e），硫辛酸合酶(LIAS)的蛋白质水平降低（图4d）表明线粒体GSH消耗会损害含有铁硫簇蛋白质的活性和稳定性。

通过在SLC25A39/40双敲除细胞中表达mito-Gshf增加线粒体GSH水平，可以完全恢复线粒体翻译机制蛋白、含铁硫簇蛋白和乌头酸酶活性水平的降低（图4e，f）。

去了这么久，要是真指望着这老头，自己恐怕坟头草都长了三分。不过，莫天罡在收到传音时，便恋恋不舍放下手中的酒瓶，推开一旁的陪酒侍女，从千里迢迢的坠龙城来到这里，当然，他对丁千秋的声称是，自己正处于一处秘境中，眼瞧就要进入秘境最后深处，稀世宝物即将唾手可得时，收到消息一瞬间放弃宝物，来寻丁千秋。

一番话让丁千秋感动不已，实则丁千秋内心也是有着小算盘，这老道果然对自己很上心，看来这个玄霄派掌门也不单纯只是个吉祥物，它到底是啥来头，回宗门一定要好好调查一番。

19大纲：

1.赵家古道事件：当今皇上对王朝的关心程度毫不上心，内政全部把持在华太师和赵家族长赵太尉手中。上次国师的人选设置上，分为两派，一派就是华太师和赵家他们倒是支持岚天宗出任国师一职，后者正在筹备六宗大比事件，倒是不对此事上心。

国师一派则是由恭亲王牵头支持，上次古道的车队里装的货物则是一些关于天一道准备在凡间开设各个分店的地图卷宗，由王府来押送，恭亲王用以平常的车队来送，好让对方瞧不出端倪，没想到赵家不知道从哪儿得知了王府和恭亲王走得近的消息，只要是最近恭亲王府的车队一律暗中找人劫掠。

20的大纲

1.丁千秋做完任务回到宗门，完成了外门弟子每年必须完成一次的任务。

2.在回外门弟子寝室时，又遇韩厉，得知一年一度的内门弟子选拔赛半月便要开始了，随后丁千秋向韩厉咨询这个内门弟子选拔赛的具体事宜，得知了：（内门弟子只有十位，几乎相当于所谓的真传了。这一代的外门弟子，尤以新晋首席弟子温元最为闪耀，已是板上钉钉下一届内门弟子争霸赛会一席之地。）