第二十四章 终结（1 / 2）

图1a：为了探究参与线粒体GSH转运过程的蛋白究竟是什么，作者首先用GSH合成抑制剂BSO处理HeLa细胞以降低全细胞和纯化线粒体中的GSH水平

图1b：然后将液相色谱-质谱(LC-MS)应用于线粒体定量蛋白质组学分析中

图1c：结果发现，经GSH的合成抑制剂BSO处理后，与未处理的细胞相比，296种蛋白的丰度发生了显著变化（图1c+b）。基因本体分析显示，GSH合成被抑制时，线粒体翻译机制相关的许多蛋白质被下调。

核因子红细胞2相关因子(NRF2)是一种诱导细胞表达抗氧化基因的转录因子，GSH合成被抑制后会上调NRF2的下游代谢靶点ALAS1和HMOX1。

此外，GSH合成被抑制后上调最多的蛋白质是SLC25A39，这是一种未表征的线粒体膜转运蛋白（图1c）。

图1D：GSH耗散时上调最多的蛋白是SLC25A39，

图1e:GSH合成限速酶GCLC的丧失也强烈诱导了SLC25A39蛋白表达。

图1F:作者发现BSO处理并不影响SLC25A39mRNA的水平。SLC25A39的蛋白水平也不受NRF2激活或氧化应激的调节。但是，在BSO处理后仅补充GSH或GSH乙酯(GSHee)时，阻止了SLC25A39蛋白水平的上调，但补充其他抗氧化剂如，trolox或ferrostatin-1时不可以。这些结果表明SLC25A39蛋白丰度会受到细胞GSH水平的调节。

三种SLC25A39敲除细胞系和补充了SLC25A39cDNA的细胞系的线粒体代谢物。

图2a观察到SLC25A39敲除细胞线粒体中GSH或GSH二硫化物水平的降低幅度最大

图2b:SLC25A39的缺失不影响全细胞GSH或大多数其他线粒体代谢物的水平，但导致线粒体GSH降低5-10倍。

图2c:含有SLC25A39的线粒体比缺乏该蛋白的线粒体多摄取六倍的GSH

补充高水平细胞外谷胱甘肽并不影响线粒体谷胱甘肽水平或恢复SLC25A39/40双敲除细胞的增殖(扩展数据图4a，b)。

图2d，e：标红，是作者将M133、D226和K329确定为潜在的底物结合残基（图2d)。基于在多个物种的SLC25A39同源物中高度保守，

线粒体NAD是一种还原性辅酶，在细胞中参与物质和能量代谢。

3a:SLC25A39-KO（敲除了）然后不影响细胞增殖而且也不完全阻断线粒体GSH的进入。筛选了细胞增殖所必需的基因。细胞要么表达了一个空载体，要么表达了SLC25A39cDNA。

3b：一种基因编辑的评分，得分最高的基因是SLC25A40

3C：与筛选结果相一致，SLC25A39/40双敲除细胞在标准培养条件下无法增殖